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第一篇 实验要求1

第一章 生物化学实验基本要求1

第一节 生化实验室学生实验守则1

第二节 实验室安全及防护知识1

第三节 生物化学实验报告3

第二篇 实验技术原理与基础实验7

第二章 生物物质的定性鉴定7

第一节 氨基酸和蛋白质的结构及性质7

第二节 核酸的结构组成特点10

第三节 糖的基本性质12

第四节 酶的催化特性13

第五节 实验部分15

实验一 蛋白质的双缩脲反应15

实验二 蛋白质和氨基酸的茚三酮反应17

实验三 蛋白质的黄色反应19

实验四 蛋白质的沉淀反应20

实验五 蛋白质的两性性质及等电点的测定24

实验六 酵母RNA的提取与鉴定26

实验七 糖的呈色反应及还原糖的检测29

实验八 α-淀粉酶的激活剂、抑制剂及其特异性分析33

实验九 肌糖原的酵解作用研究36

实验十 生物氧化作用研究38

第三章 纸层析技术42

第一节 纸层析基本原理42

第二节 影响相对迁移率的主要因素43

第三节 实验部分45

实验一 氨基酸的纸层析分离45

实验二 纸层析法检测谷丙转氨酶活性47

第四章 薄层层析技术50

第一节 薄层层析原理50

第二节 固定相支持介质的选择51

第三节 实验部分53

实验一 硅胶薄层层析法分离鉴定水果中的糖类物质53

实验二 DEAE-钎维素薄层层析分离鉴定核苷酸55

第五章 离子交换层析技术58

第一节 离子交换层析原理58

第二节 核酸蛋白质检测仪的构造及使用63

第三节 实验部分64

实验一 离子交换法制备无离子水64

实验二 DEAE-Cellulose柱层析分离纯化大蒜超氧化物歧化酶67

第六章 凝胶过滤层析技术72

第一节 凝胶过滤层析原理72

第二节 实验部分78

实验一 分子筛过滤层析脱盐78

实验二 分子筛层析法分离蛋白质及相对分子质量测定80

第七章 亲和层析技术84

第八章 离心技术89

第九章 分光光度技术94

第一节 分光光度技术的原理94

第二节 分光光度计的构造及使用97

第三节 实验部分100

实验一 双缩脲法测定蛋白质含量100

实验二 Folin-酚试剂法测定蛋白质浓度102

实验三 紫外吸收法测定蚯蚓提取液的蛋白质含量104

实验四 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度106

实验五 花椰菜DNA的提取与二苯胺法测定DNA的含量108

实验六 植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮比色法）111

实验七 兔肝转氨酶活力测定113

实验八 酵母发酵过程中无机磷的利用（定磷法）116

第十章 电泳技术119

第一节 电泳的基本原理119

第二节 电泳的分类121

第三节 常用的电泳技术122

第四节 染色方法133

第五节 电泳有关的仪器及使用135

第六节 实验部分137

实验一 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白137

实验二 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大蒜超氧化物歧化酶139

实验三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定超氧化物歧化酶的相对分子质量143

实验四 等电聚焦电泳法测定鸡卵类黏蛋白的等电点146

第十一章 蛋白质免疫印迹技术149

第一节 蛋白质免疫印迹技术原理149

第二节 抗血清的制备153

第十二章 滴定技术159

第一节 概述159

第二节 实验部分160

实验一 温度、pH对糖化酶活力的影响160

实验二 果蔬中维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）163

第三篇 综合性实验167

第十三章 实验举例167

实验一 微量凯氏定氮法测定牛奶蛋白质含量167

实验二 鸡卵类黏蛋白的分离纯化、活性及相对分子质量测定172

实验三 蛋白质免疫印迹检测小鼠肝脏、脾脏及血液超氧化物歧化酶179

实验四 胰蛋白酶米氏常数及最大反应速度的测定183

实验五 胰蛋白酶的固定化及其性质186

实验六 亲和层析纯化蚯蚓丝氨酸蛋白酶191

实验七 植物过氧化物同工酶提取、活性测定及电泳鉴定196

实验八 大豆多糖的提取及测定199

实验九 定磷法测定酵母核糖核酸的含量203

实验十 小鼠肝脏DNA的提取及测定207

实验十一 兔肝总RNA的提取及RT-PCR210

参考文献215

附录一 常用标准溶液的配制和标定216

附录二 常用缓冲液的配制方法220

附录三 硫酸铵饱和度的调整用表225

附录四 柱层析材料227